Antico Refettorio del convento agostiniano, l'ambiente è uno dei rari resti del complesso medievale dopo la ristrutturazione del Brunelleschi, a lungo ignorato tanto che alla fine dell'Ottocento fu usato addirittura come deposito dei tram. A quell'epoca si intervenne aprendo la parete sulla piazza e distruggendo l'Ultima Cena di Andrea Orcagna. I frammenti che ne rimangono sono sovrsti ancora da una grande Crocifissione, risalente agli anni fra il 1360 e il 1365. Nella grande sala è oggi esposta la collezione di sculture che va dall'XI al XV secolo donata alla città da Salvatore Romano.
Piazza Santo Spirito, 29